国产精品熟女,操我逼 欧美91,henhenchaav,人妻伦一区二区三区久久

當(dāng)前位置:
首頁(yè) > 技術(shù)文章 > 流式細(xì)胞術(shù)實(shí)驗(yàn)操作步驟
目錄導(dǎo)航 Directory
服務(wù)熱線(xiàn)
技術(shù)支持Article
流式細(xì)胞術(shù)實(shí)驗(yàn)操作步驟
點(diǎn)擊次數(shù):179 更新時(shí)間:2025-05-27

流式細(xì)胞術(shù)實(shí)驗(yàn)操作步驟

 

流式細(xì)胞技術(shù)(Flow cytometry, FCM)是利用流式細(xì)胞儀進(jìn)行的一種單細(xì)胞定量分析和分選技術(shù)。流式細(xì)胞術(shù)是單克隆抗體及免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)、激光和電子計(jì)算機(jī)科學(xué)等高度發(fā)展及綜合利用的高技術(shù)產(chǎn)物,它能有效地從單細(xì)胞水平區(qū)分異質(zhì)性細(xì)胞群體,檢測(cè)對(duì)象包括但不限于懸浮細(xì)胞、貼壁細(xì)胞或從實(shí)體組織分離的單細(xì)胞懸液和其他生物顆粒。

 

一、細(xì)胞表面染色步驟

1.細(xì)胞準(zhǔn)備:

1.1 采集全血或組織(脾,淋巴結(jié),胸腺和骨髓等),用細(xì)胞染色buffer(或PBS)制成單細(xì)胞懸液。對(duì)于體外刺激的細(xì)胞,直接將刺激后的細(xì)胞懸浮在細(xì)胞染色buffer(或PBS)中,然后進(jìn)行第2步。

1.2 加滿(mǎn)細(xì)胞染色buffer(或PBS, 1000 rpm 離心細(xì)胞懸液5分鐘,棄掉上清。

 

2. 紅細(xì)胞裂解:

2.1 如果需要裂解紅細(xì)胞(如脾臟),將10×紅細(xì)胞裂解液(RBC)用H2O稀釋到1×,放置到室溫。將細(xì)胞重懸于3 mL 1 × RBC中,室溫孵育5分鐘。

2.2 加入10 mL細(xì)胞染色buffer(或PBS)終止紅細(xì)胞裂解,1000 rpm離心細(xì)胞懸液5分鐘,棄掉上清。

2.3 重復(fù)洗滌一次,同步驟1.2。

2.4 細(xì)胞計(jì)數(shù),用細(xì)胞染色buffer(或PBS)將細(xì)胞制成1×107 /mL懸液。將100 μL細(xì)胞懸液加入流式管中備用。

 

3. 封閉Fc受體:

        封閉Fc受體能減少染色過(guò)程中的非特異性染色。小鼠中,純化的CD16/CD32單抗能和FcγR/Ⅱ結(jié)合,封閉非特異性染色,可加入5-10 μg/mLAnti-Mouse CD16/32單抗100 μL,冰上孵育10分鐘。對(duì)于人和大鼠,可直接使用過(guò)量的與熒光抗體相同來(lái)源和亞型不相關(guān)的純化Ig或者血清進(jìn)行阻斷。

 

4. 細(xì)胞染色:

4.1 按照說(shuō)明書(shū)的推薦用量加入熒光標(biāo)記的抗體,混勻后置于冰上,避光孵育30分鐘。

4.2 加入5 mL FACs buffer (PBS) 重懸細(xì)胞,1000 rpm離心細(xì)胞懸液5分鐘,棄掉上清。

4.3 加入0.5 mL FACs buffer(PBS)重懸細(xì)胞,用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)和分析。

 

注意事項(xiàng)

1. 在抗體使用之前,快速離心一下,使之聚集到管的底部。

2. 熒光標(biāo)記的抗體應(yīng)該避光4℃保存,不要冷凍。

3. 當(dāng)染色的時(shí)候,固定或延遲分析可能降低某些抗體的熒光信號(hào)。為了得到更好的結(jié)果,染色后應(yīng)該馬上分析。

 

二、細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子染色步驟

1. 細(xì)胞準(zhǔn)備:

1.1 收集細(xì)胞,用細(xì)胞染色buffer(或PBS)制成單細(xì)胞懸液,調(diào)整細(xì)胞濃度約為1 × 107/mL。

1.2  如需裂解紅細(xì)胞,將紅細(xì)胞裂解液(RBC)稀釋至1×,并平衡至室溫,用適量的1×紅細(xì)胞裂解液將細(xì)胞懸起,室溫避光孵育10分鐘;加入細(xì)胞染色buffer(或PBS)終止裂解,1000 rpm離心5分鐘,棄去上清。加入細(xì)胞染色buffer(或PBS)重復(fù)洗滌一次,調(diào)整細(xì)胞濃度約為1 × 107/mL。

1.3 100 μL細(xì)胞/管(約1 × 106細(xì)胞),分別加到已經(jīng)標(biāo)記好的流式管底部。

 

 

2. 固定:

2.1 如需要表面染色,則依照“細(xì)胞表面染色步驟"選用適宜抗體進(jìn)行表面染色。然后用稀釋至1×的細(xì)胞固定/破膜液(Fixation/Permeabilization buffer),將流式管中的細(xì)胞懸起,室溫避光孵育30分鐘。

2.2 1000 rpm離心5分鐘,棄去上清。

 

 

3. 破膜:

3.1 用稀釋至1×細(xì)胞破膜buffer將固定過(guò)的細(xì)胞懸起,1000 rpm離心力離心5分鐘,棄去上清。

3.2 重復(fù)洗一次,1000 rpm離心5分鐘,棄去上清。

3.3 加入1 mL 1×細(xì)胞破膜buffer,4℃避光孵育30分鐘;1000 rpm離心5分鐘,棄去上清。

 

 

4. 胞內(nèi)染色:

4.1 100 μL 1×細(xì)胞破膜buffer重懸細(xì)胞,加入相應(yīng)的抗體,混勻,4℃避光孵育至少30分鐘。

4.2 加入2 mL 1×細(xì)胞破膜buffer懸起細(xì)胞,1000 rpm離心5分鐘,棄去上清。

4.3 加入2 mL細(xì)胞染色buffer(或PBS)懸起細(xì)胞,1000 rpm離心5分鐘,棄去上清。

4.4 加入0.5 mL細(xì)胞染色buffer(或PBS)重懸細(xì)胞,用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè)和分析。

 

注意事項(xiàng)

1. 同一個(gè)細(xì)胞同時(shí)做細(xì)胞表面和細(xì)胞內(nèi)的蛋白,建議先做細(xì)胞表面染色,再固定、破膜。

2. 細(xì)胞內(nèi)染色推薦使用同型對(duì)照。

從2011年開(kāi)始我們致力于在生命科學(xué)領(lǐng)域、生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)及論文潤(rùn)色服務(wù),協(xié)助客戶(hù)各類(lèi)實(shí)驗(yàn)服務(wù)及論文潤(rùn)色十多年,是您值得信賴(lài)的科研合作伙伴!

如果您受時(shí)間、試驗(yàn)條件等限制而無(wú)法完成您的課題研究,歡迎您與我們聯(lián)系。

 

實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù):

 


滬公網(wǎng)安備 31011802001676號(hào)

一区无码人妻精品| 动漫h| 高清孕妇孕交╳╳交| 在线精品亚洲一区二区动态图 | 中文字幕熟妇人妻在线视频| 国产在线精品国偷产拍| 亚洲国产精品一区二区久久HS| 成人国产一区二区三区精品| 久久精品中文无码资源站| 特黄熟妇丰满人妻无码| 欧美老肥婆性猛交视频| 欧美久久久久| 亚洲A无码综合A国产AV中文| 消息称老熟妇乱视频一区二区| 久久99精品国产.久久久久| 国产精品成人国产乱一区| 上杭县| 18禁黄网站禁片免费观看在线| 暖暖视频免费高清日本| 亚洲av第一网站久章草| 巨人精品福利官方导航| 亚洲AV中文乱码一区二| 香蕉视频在线精品视频| 四虎成人精品在永久免费| 日本高清视频www夜色资源| 国产成人调教在线视频| 人妻无码中文字幕一区二区三区| 亚洲AV无码久久寂寞少妇| 久青草久青草视频在线观看| 久久国产成人午夜AV影院| 亚洲国产一区二区三区亚瑟| 人妻少妇精品无码专区| 婷婷开心色四房播播| 18禁国产精品久久久久久KTV| 99热这里只有精品6国产免费| 国产精品亚洲А∨天堂| 国产免费观看久久黄AV片| 成人午夜高潮A∨猛片| 久久综合亚洲色HEZYO国产| 久久久久久国产精品免费无码| 欧美一本|